細(xì)胞培育室設(shè)計(jì)方案
組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實(shí)驗(yàn)室工作的主要區(qū)別在于要求保持無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。
一.細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室包括:無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲(chǔ)藏。
1.無菌操作區(qū)
(1)無菌操作室應(yīng)劃為三部分:更衣室、緩沖間、無菌操作間無菌操作間專用于無菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。其大小要適當(dāng),且其頂部不宜過高(不超過2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果;無菌操作間的空氣消毒:紫外線燈產(chǎn)生臭氧,并且室內(nèi)溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康。空氣過濾的恒溫恒濕裝置。
(2)凈化工作臺(tái):操作簡(jiǎn)單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細(xì)胞培養(yǎng)室使用的凈化工作臺(tái)主要有兩種:a)側(cè)流式或稱垂直式 b)外流式或稱水平層流式。
2.孵育區(qū)本區(qū)對(duì)無菌的要求雖不比無菌區(qū)嚴(yán)格,但仍需清潔無塵,因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少而非來往穿行的區(qū)域。
3.制備區(qū)在該區(qū)主要進(jìn)行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備。
4.儲(chǔ)藏區(qū)主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等,此環(huán)境也需要清潔無塵。
5.清洗和消毒滅菌區(qū)清潔和消毒滅菌區(qū)應(yīng)與其他區(qū)域分開,主要進(jìn)行所有細(xì)胞培養(yǎng)器皿的清洗、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制備等工作。
(二)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備
a)顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一,便于掌握細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并觀察有無污染等。若有條件,尚可配置帶有照相系統(tǒng)的高質(zhì)量相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統(tǒng)或縮時(shí)電影拍攝裝置等,以便隨時(shí)觀察、記錄、攝影細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
b)CO2培養(yǎng)箱——目前多數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)室已廣泛使用。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)是能夠提供進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%),易于使培養(yǎng)液的pH保持穩(wěn)定,適用于開放或半開放培養(yǎng)。
c)水純化裝置:細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)水的質(zhì)量要求較高,細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。目前國(guó)內(nèi)使用較多的是自動(dòng)雙重純水蒸餾器(石英管加熱),使用方便,安全、蒸餾速度快(1600ml/h)。
d)冰箱:細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備
e)細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器:儲(chǔ)存器常用的是液氮罐。
f)離心機(jī):一般可常規(guī)配置4000rpm的國(guó)產(chǎn)臺(tái)式離心機(jī),例如細(xì)胞沉降,使用80~100g的離心機(jī)即可,離心力過大有時(shí)可能引起細(xì)胞的損傷。
g)天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
h)濾器:多采用濾過消毒以除去細(xì)菌。
i)培養(yǎng)用器皿耗材:培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿:、多孔培養(yǎng)板、貯液瓶、吸管、加樣器等
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