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臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室案例

作者:admin 出處:科瓦特發(fā)表時(shí)間:2016-08-29 13:30:00
 

項(xiàng)目客戶:山東大學(xué)附屬生殖醫(yī)院
項(xiàng)目名稱:臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室,分子遺傳室
項(xiàng)目面積:17460平方米
項(xiàng)目地點(diǎn):山東濟(jì)南
建設(shè)單位:中山市科瓦特實(shí)驗(yàn)室
項(xiàng)目內(nèi)容
實(shí)驗(yàn)室裝修工程
實(shí)驗(yàn)室空調(diào)與潔凈工程
實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)工程
實(shí)驗(yàn)室供氣系統(tǒng)
實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng)
實(shí)驗(yàn)室環(huán)保系統(tǒng)

以下為科瓦特實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收后部分案例現(xiàn)場展示

臨床基本擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室
             實(shí)驗(yàn)室消毒區(qū)與傳遞區(qū)
基本實(shí)驗(yàn)室
實(shí)驗(yàn)室裝修細(xì)節(jié)圖:
擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室緩沖區(qū)PCR實(shí)驗(yàn)室
           實(shí)驗(yàn)室走廊                                                      主實(shí)驗(yàn)室
實(shí)驗(yàn)室空調(diào)與照明PCR實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備區(qū)
         實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)過濾與照明                                       PCR實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備區(qū)
分子遺傳室實(shí)驗(yàn)室遺傳基因研究區(qū)
           分子遺傳室                                                   遺傳基因研究區(qū)
PCR樣本分析區(qū)PCR清洗區(qū)
                PCR標(biāo)本制備區(qū)                                       PCR清洗區(qū)
 1 概述 
臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)又稱PCR實(shí)驗(yàn),這種實(shí)驗(yàn)需要有能保證絕對(duì)安全、配置合理的實(shí)驗(yàn)室和非常規(guī)范的操作
為前提。近年來對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)越來越得到重視,因?yàn)樗鼘?duì)檢測結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性
和安全性起到至關(guān)重要的作用。本文主要從臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的平面布局,空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、氣
流控制和污染的防制幾個(gè)方面對(duì) 
實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)中的主要特點(diǎn)進(jìn)行了闡述。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核
心問題是如何避免污染。因此,實(shí)驗(yàn)室的平面布局、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、氣流控制等都是圍繞這個(gè)核心問
題進(jìn)行的。下面就對(duì)這幾個(gè)方面分別進(jìn)說明。 

 
2 PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局 
臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域:試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混
合物配制
和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染,進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,
即只能從試劑貯存
和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。 各實(shí)驗(yàn)區(qū)之
間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進(jìn)行。 

PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局圖
                               PCR實(shí)驗(yàn)室平面布置示意圖如圖1所示。 
     
3 實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制 
PCR實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣
流組織形式。
同時(shí),要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。 
 
3.1 試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) 
該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材
料應(yīng)直接運(yùn)
送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試
劑。 
對(duì)與氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。 
 
3.2 標(biāo)本制備區(qū) 
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA
時(shí)cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?,以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污
染。另外,由于在加樣操作中可能會(huì)
發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。 
 
3.3 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū) 
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的
加入和主反應(yīng)混合
液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式PCR測定中,
通常在 輪擴(kuò)增后必須打開反應(yīng)
管,因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性,第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。 
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,
應(yīng)盡量減少在本區(qū)
內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。 
 
3.4 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) 
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測定。如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測,此區(qū)域可不設(shè)。 
本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免擴(kuò)
增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散
至其它區(qū)域。 
 
4 污染的預(yù)防與控制 
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問題是如何避免污染。在實(shí)際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴(kuò)增產(chǎn)物的污
染;天然基因組DNA
的污染;試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染,實(shí)驗(yàn)就必須停止,直到
找到污染源為止,而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須作廢,
需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所以發(fā)生污染后再圍繞實(shí)驗(yàn)室來尋找污染源
不但耗時(shí)而且繁瑣,浪費(fèi)人力物力。因此要避免污染,首先應(yīng)是
預(yù)防,而不是排除。 
 
4.1 工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分 
(1)各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)置合理; 
(2)各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域要有明顯的標(biāo)記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等),以避免各個(gè)不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)
備物品、試劑等發(fā)生
混淆。 
 
4.2 合理的系統(tǒng)設(shè)置 
(1)合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置,盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng); 
(2)嚴(yán)格的氣流壓力控制,保證不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。
 
4.3 規(guī)范的操作 
(1)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn),經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)
的工作; 
(2)在實(shí)驗(yàn)操作過程中,操作者必須戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效
地防止污染的措施; 
(3)清潔工作及時(shí)、正確。實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后,必須立即對(duì)本區(qū)進(jìn)行清潔。除常規(guī)的消毒液體對(duì)表面進(jìn)行
擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對(duì)一些實(shí)驗(yàn)設(shè)備還應(yīng)進(jìn)行高壓消毒處理。 
 
4.4 嚴(yán)格的管理 
(1)嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員。與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室,有條件的情況下要設(shè)置獨(dú)立
的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)
的門; 
(2)在各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服(如不同顏色),當(dāng)工作人員離開時(shí)不得將本區(qū)的
工作服帶至其它區(qū)域; 
(3)盡量減少在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性。 
(4)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,廢液不能在實(shí)驗(yàn)室中傾倒,必須經(jīng)消毒液浸泡消毒
后在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方棄
掉,用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,如焚燒等; 
(5)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。 
 
4.5 完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施 
完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件,應(yīng)根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備
和儀器,如超凈工作臺(tái)、
離心機(jī)、加樣器等。

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